DB21T 1687一2008 生鮮肉中三聚氰胺的測定
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- DB21T 1687-2008 生鮮肉中三聚氰胺的測定1.1.1 明書)。
1.1.2 異辛烷(C8H18)
1.1.3 三氯甲烷(CHCl3)
1.1.4 異辛烷+三氯甲烷混合液:準確量取40ml異辛烷(4.2.3)和60ml三氯甲烷(4.2.4),混勻即得。
1.1.5 10%甲醇/20mMPBS:稱取0.62gNaH2PO4•H2O,5.73gNa2HPO4•12H2O和9gNaCl用蒸餾水溶解,并定容至1000mL,取此溶液900mL,加入100mL甲醇混勻即得。
1.2 儀器和設備
1.2.1 酶標儀(帶450nm濾光片)。
1.2.2 渦旋混合器。
1.2.3 冷凍離心機。
1.2.4 微量加樣器:20μL、50μL、100μL、150μL、250μL。
1.2.5 恒溫干燥箱。
1.2.6 分析天平:感量0.01g。
1.2.7 振蕩器
4.3.8 絞肉機
4.3.9 勻漿機
1.3 測定步驟
1.3.1 樣品處理
準確稱量2g試料(3.1)精確到0.01g,加入10mL 10%甲醇/20mMPBS(4.2.6),渦旋30s,振蕩5min,4000r/min離心5min,取2mL上清液加入2mL異辛烷+三氯甲烷混合液(4.2.5),混勻,4000r/min離心5min,靜置,取上層150μL待測。
1.3.2 測試程序
取出欲測數量的微孔條安插在酶標板上,分別吸取0μg/L、20μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L標準溶液(4.2.2)和試樣萃取液(4.4.1)各150μL至包被有三聚氰胺抗體的對應微孔中,分別加入50μL三聚氰胺酶標記物溶液,振蕩使混勻,25℃左右孵育30min。傾盡酶標板,清洗液(4.2.2)洗板4次,拍干。加100μL底物(4.2.2)至每個微孔中,振蕩使混勻,25℃左右孵育30min。加100μL終止液(4.2.2)至每個微孔中,振蕩混勻,450nm下讀取各微孔吸光度值。
注:不同品牌的試劑盒其操作步驟可能略有差異,比如稀釋倍數,具體操作步驟可根據試劑盒使用說明書略作調整。
試劑盒使用前恢復到室溫。
標準和樣品做平行試驗以增加準確性。
1.4 結果計算
以空白溶液(濃度為0的標準溶液)的吸光度值為100%作為計算基準,折算出各標準溶液和試樣萃取液的相對吸光度值。
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